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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • YF?594 Click-iT EdU Imaging Kits(红色荧光)

    产品货号: C6017

    产品规格: 20T/100T/500T/1000T

    目录价(元):288/1100/2200/3600

    可替代的同类产品

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

20 T

100 T

500 T

1000 T

保存温度

稳定性

  组分A  10 mM EdU

40 ?L

0.2 mL

1 mL

2 mL

-20

按指定温度保存可有效放置一年

  组分B  YF?488/555/594/647A Azide

4 ?L

20 ?L

100 ?L

200 ?L

-20,避光

  组分C  10× Click-iT EdU反应缓冲液

200 ?L

1 mL

5 mL

10 mL

2-8

  组分D  CuSO4

100 ?L

0.5 mL

2.5 mL

5 mL

2-8

  组分E  Click-iT EdU缓冲液添加物

6 mg

30 mg

150 mg

2 × 150 mg

2-8

  组分F  Hoechst 33342

5 ?L

25 ?L

125 ?L

250 ?L

2-8

规格:上述反应次数是针对96孔板培养的细胞。(不同容器细胞成像的具体用量可参考附表1.EdU培养基及染色反

应液的使用量参考

荧光光谱数据:
YF?488 Azide:495/519 nm;YF?555 Azide:555/565 nm;YF?594 Azide:594/617 nm;

YF?647A Azide:650/670 nm;Hoechst 33342: 350/461 nm, bound to DNA。

其他所需试剂:
10 mM PBS, pH7.2-7.6
中性多聚甲醛固定液(4%多聚甲醛 in PBS )
2 mg/ml 甘氨酸溶液(去离子水配制)
促渗试剂(0.5% Triton X-100 in PBS)
3% BSA in PBS, pH7.2-7.6
18×18 mm 盖玻片


储存条

-20℃避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见说明书。

产品先容
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。最精确的检测细胞增殖方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)试剂盒是一种嘧啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测是基于“点击”反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。
本试剂盒中,EdU试剂含有炔烃,而YF ? 594 Azide染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效,易于使用。只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。标准化的戊二醛固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞,而Brdu方法则需要DNA变性(如酸变性、热变性或者用DNase消化)去暴露BrdU,从而方便BrdU抗体结合。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组份,可以检测细胞增殖与细胞周期分析。对于细胞周期的分析,试剂盒可以提供蓝色细胞核染料Hoechst33342。

说明书:


 UE-C6017

常见问题解答:


YF?488/555/594/647有什么区别?
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同,可根据偏好或需求进行选择。

可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗? 
可以。EdU是小分子,可以穿透植物细胞的细胞壁。

质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗?检测顺序是什么?
可以兼容。但本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,所以要先检测这类荧光蛋白,再进行Click反应。

观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时,也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应,验证Click反应信号的特异性。

为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号? 
1.请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
2.为确保Click反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;
3.由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对某些含有这些物质的实验样品来说,进行Click反应前,可能需要增加额外的洗涤步骤;
4.当铜离子在合适的化合价时,Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。 
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。 

能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测?
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

如何对细胞核进行复染?
试剂盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色。也可选择使用DAPI,但是Hoechst 33342对于活细胞的穿透力要比DAPI强。

引用及参考文献:


引用文献
1.Labeling and Tracking of Mesenchymal Stem Cells with EdU
应用方向:细胞标记示踪

2.Primary cilia control hedgehog signaling during muscle differentiation and are deregulated in rhabdomyosarcoma
应用方向动物细胞增殖分析

3.Silencing of STRN4 suppresses the malignant characteristics of cancer cells
应用方向动物细胞增殖检测

4.A rapid and robust assay for detection of S-phase cell cycle progression in plant cells and tissues by using ethynyl deoxyuridine
应用方向植物细胞增殖检测

5.A rapid non-radioactive technique for measurement of repair synthesis in primary human fibroblasts by incorporation of ethynyl deoxyuridine (EdU)
应用方向DNA损伤修复

6.Visualization of Mitochondrial DNA Replication in Individual Cells by EdU Signal Amplification
应用方向线粒体活性检测

7.Human cytomegalovirus UL44 concentrates at the periphery of replication compartments, the site of viral DNA synthesis
应用方向病毒活性检测
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