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YF?647A Click-iT EdU Imaging Kits（远红荧光）
产品概述：
产品内容
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组分 |
20 T |
100 T |
500 T |
1000 T |
保存温度 |
稳定性 |
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组分A 10 mM EdU |
40 ?L |
0.2 mL |
1 mL |
2 mL |
-20℃ |
按指定温度保存可有效放置一年 |
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组分B YF?488/555/594/647A Azide |
4 ?L |
20 ?L |
100 ?L |
200 ?L |
-20℃，避光 |
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组分C 10× Click-iT EdU反应缓冲液 |
200 ?L |
1 mL |
5 mL |
10 mL |
2-8℃ |
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组分D CuSO4 |
100 ?L |
0.5 mL |
2.5 mL |
5 mL |
2-8℃ |
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组分E Click-iT EdU缓冲液添加物 |
6 mg |
30 mg |
150 mg |
2 × 150 mg |
2-8℃ |
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组分F Hoechst 33342 |
5 ?L |
25 ?L |
125 ?L |
250 ?L |
2-8℃ |
规格：上述反应次数是针对96孔板培养的细胞。（不同容器细胞成像的具体用量可参考附表1.EdU培养基及染色反应液的使用量参考）
荧光光谱数据：
YF?488 Azide：495/519 nm；YF?555
Azide：555/565
nm；YF?594
Azide：594/617
nm；
其他所需试剂:
10 mM PBS, pH7.2-7.6
中性多聚甲醛固定液（4%多聚甲醛 in PBS ）
2 mg/ml 甘氨酸溶液（去离子水配制）
促渗试剂（0.5% Triton X-100 in PBS）
3% BSA in PBS, pH7.2-7.6
18×18 mm 盖玻片
储存条件
产品先容
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。最精确的检测细胞增殖方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测是基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。
本试剂盒中，EdU试剂含有炔烃，而YF ? 647 Azide染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。标准化的戊二醛固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞，而Brdu方法则需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用DNase消化）去暴露BrdU，从而方便BrdU抗体结合。
常见问题解答：
◆YF?488/555/594/647有什么区别？
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同，可根据偏好或需求进行选择。
◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?
可以。EdU是小分子，可以穿透植物细胞的细胞壁。
◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗？检测顺序是什么？
可以兼容。但本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，所以要先检测这类荧光蛋白，再进行Click反应。
◆观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应，验证Click反应信号的特异性。
◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？
1.请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
2.为确保Click反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；
3.由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；
4.当铜离子在合适的化合价时，Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。
◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测？
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
◆如何对细胞核进行复染？
试剂盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色。也可选择使用DAPI，但是Hoechst 33342对于活细胞的穿透力要比DAPI强。
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