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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • YF?488 TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit(绿色荧光)

    产品货号: T6013

    产品规格: 20T/50T

    目录价(元):1800/3200

    可替代的同类产品:TUNEL FITC/BrightGreen Apoptosis detection kit

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

20T

50T

  A.  TUNEL Equilibration Buffer

2×1mL

5mL

  B.  YF488 TUNEL Reaction Buffer        

   2×0.5mL   

   5×0.5mL   

  C.  TdT Enzyme

20 μL

50 μL

  D.  Proteinase K (2 mg/mL)
40 μL
100 μL
  E.  DNase I (2 U/μL) 
5 μL
13 μL
  F.  10 × DNase I Buffer
100 μL
260 μL

储存条件
本产品应置于-20℃储存; TUNEL Reaction Buffer 避光储存于-20℃,避免反复冻融。有效期见外包装。
注意:TUNEL Equilibration Buffer 和 TUNEL Reaction Buffer 中含有有毒、致癌成分 Sodium cacodylate trihydrate 和 Cobaltous chloride,使用时请佩戴口罩、手套,接触皮肤后,请马上有大量水冲洗,废液请按有毒物质处理。
 
产品先容
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解, 这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp 的整数倍, 表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状 Ladder 图谱,本试剂盒采用 TUNEL 法,应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)在凋亡细胞断裂 DNA 的 3?-OH 末端催化掺入 YF488-dUTP 。 YF488-dUTP 标记的 DNA 可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。TUNEL 法可以选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。TUNEL 实验中, TdT 酶催化 dUTP 掺入 断裂的 DNA 链的 3?-OH 末端。抗原标记的 dUTP(如 digoxin-dUTP、生物素-dUTP),因为它可以直接进行原位检测,是一种更快速、直接的检测手段。 

注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

说明书:


   UE-T6013

常见问题解答:


为什么出现了一些非特异标记?
1.有些细胞或组织,比如平滑肌,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致假阳性,出现非特异性的荧光标记。因此,取出细胞或组织后要马上固定并充分固定,以阻止这些酶的活性; 
2.使用了不恰当的固定液,推荐使用4%多聚甲醛;
3.TUNEL反应时间过长,或者在反应中细胞或组织表面未能一直保持湿润。因此。要注意控制反应时间,并确保反应液能很好地覆盖样品 。
4.石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合,所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底;
5.有些试剂或细胞存在自发荧光,选择染料时要避开自发荧光的颜色。

为什么没有染上荧光?
1.固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛,现用现配。不建议使用乙醇,乙醇固定液对组织的渗透力较弱,影响TUNEL标记效率;
2.通透不充分。细胞与冰冻切片,可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min,石蜡切片推荐使用蛋白酶K,37℃通透30 min;不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同,可以适当调整;
3.延长标记时间至2h,并适当增加TdT酶及dUTP的用量;
4.确定实验对象细胞凋亡时有DNA断裂现象发生。

为什么假阳性过高?
1.阴性对照有染色,则说明是非特异性染色;
2.若阴性对照无染色,那么可能是由于固定不充分,组织内有内源性核酸酶的残留,使得DNA全部被切断呈现阳性染色。

如何对细胞核进行复染?
可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。

为什么荧光背景高?
1.支原体污染:可以使用支原体染色检测试剂盒验证;
2.TUNEL反应过强:可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作,稀释后的TdT酶仅供当日使用  。

引用及参考文献:


1.OGG1-initiated base excision repair exacerbates oxidative stress-induced parthanatos
Ruoxi Wang, Chunshuang Li, Ping Qiao, Yaoyao Xue, Xu Zheng, Hongyu Chen, Xianlu Zeng,Wenguang Liu, Istvan Boldogh, Xueqing Ba
Cell Death&Disease(2018) DOI: 10.1038/s41419-018-0680-0
应用方向:流式分析

2.Caffeine Targets SIRT3 to Enhance SOD2 Activity in Mitochondria
Huanhuan Xu, Chunxia Gan, Ziqi Gao, Yewei Huang, Simin Wu, Dongying Zhang, Xuanjun Wang,Jun Sheng
Frontiers in Cell and Developmental Biology

参考文献
1.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage
应用方向:细胞凋亡染色&流式分析

2.Notch gain of function in mouse periocular mesenchyme downregulates FoxL2 and impairs eyelid levator muscle formation, leading to congenital blepharophimosis
应用方向:切片染色

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