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Biotin TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit
产品概述：
产品内容
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组分 |
20T |
50T |
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A. Biotin TUNEL Reaction Buffer |
2×0.5 mL |
5×0.5 mL |
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B. TdT酶 |
20 μL |
50 μL |
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C. Streptavidin-HRP |
20μL |
50μL |
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D. Streptavidin-HRP稀释液 |
1mL |
2×1.25mL |
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E. DAB显色液A |
100μL |
250μL |
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F. DAB显色液B |
1mL |
2.5mL |
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G. DAB显色液C |
50μL |
125μL |
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H. Proteinase K (2 mg/mL) |
40 μL |
100 μL |
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I. DNase I (2 U/μL) |
5 μL |
13 μL |
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J. 10 × DNase I Buffer |
100 μL |
260 μL |
储存条件
本产品应避光置于-20℃储存； TUNEL Reaction Buffer 避光储存于-20℃，避免反复冻融。有效期见外包装。
注： TUNEL EquiLibration Buffer、 TUNEL Reaction Buffer 和 DAB 显色液中含有有毒、致癌成分 Sodium cacodylate trihydrate 、Cobaltous chloride 以 及 3,3- Diaminobenzidine ( DAB)，使用时请佩戴口罩、手套，接触皮肤后，请马上有大量水冲洗，废液请按有毒物质处理。
产品介绍
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解，这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律，所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp的整数倍，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状Ladder图谱，本试剂盒采用 TUNEL 法，应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TerminaL DeoxynucLeotidyL Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂DNA 的3?-OH末端催化掺入生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-X-dUTP)。随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)特异结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜观察并计数凋亡细胞。 由于正常的或正在增值的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3?-OH 形成，很少能被染色。TUNEL 法可以选择性的对凋亡细胞直接进行原位检测， 而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞，是一种更快速、直接的检测手段。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.叠氮化钠对HRP有抑制作用，实验中请勿使用含有叠氮化钠的试剂。
常见问题解答：
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现象 |
可能原因 |
建议 |
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非特异性染色 |
有些细胞或组织的核酸酶或聚合酶的酶活性水平较高 |
取细胞或组织后马上固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。 |
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TdT 酶反应时间过长或Tunel反应过程中反应液渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润。 |
注意控制反应时间，并确保TdT 酶反应液能很好地覆盖样品。 |
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使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液 |
采用推荐的固定液 |
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标记率低 |
如果以乙醇或甲醇固定的样品则标记效率较低（因为在固定时染色质未能与蛋白质交联，而在操作中丢失） |
采用推荐的固定液 |
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固定时间过长，导致交联程度过高 |
减少固定时间 |
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贴壁细胞如果使用药物诱导凋亡，会使发生凋亡细胞的贴壁性会减弱 |
在凋亡诱导结束后，可以对多孔板进行1000g离心5min，然后再吸出培养基并用PBS洗涤。如果没有适合的离心机，请注意操作轻缓，防止发生凋亡的细胞在洗涤时被洗去。后续整个操作也需要轻缓 |
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染色背景很高 |
支原体污染 |
请使用支原体染色检测试剂盒检测是否为支原体污染 |
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TdT 酶反应时间过长 |
注意控制反应时间 |
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高速分裂和增殖的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA 断裂。 |
在非高增殖期取样检测 |
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DAB 孵育时间过长 |
减少DAB 染色时间 |
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Biotin-X-dUTP 的非特异性结合 |
在TdT 酶反应之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。 |
引用及参考文献：
引用文献
1.Enhanced anti-tumor activity by the combination of TRAIL/Apo-2L and combretastatin A-4 against human colon cancer cells via induction of apoptosis in vitro and in vivo.
应用方向：检测结肠癌细胞的凋亡
2.Antiproliferation and cell apoptosis inducing bioactivities of constituents from Dysosma versipellis in PC3 and Bcap-37 cell lines.
应用方向：检测人前列腺癌细胞株PC3、乳腺癌细胞株Bcap-37、胃癌细胞株BGC-823的凋亡
3.Caudatin-2,6-dideoxy-3-O-methy-β-D-cymaropyranoside 1 induced apoptosis through caspase 3-dependent pathway in human hepatoma cell line SMMC7721.
应用方向：检测人肝癌细胞系SMMC7721的凋亡
4.Chemical constituents of the ethyl acetate extract of Belamcanda chinensis (L.) DC roots and their antitumor activities.
应用方向：检测PC3、MGC-803、Bcap-37和MCF-7细胞系的凋亡
5.Synthesis and cytotoxicity of novel ursolic acid derivatives containing an acyl piperazine moiety.
应用方向：检测胃癌细胞MGC-803和乳腺癌细胞Bcap-37的凋亡
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