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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • Biotin TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit

    产品货号: T6068

    产品规格: 20T/50T

    目录价(元):1800/3200

    可替代市场上同类产品

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

20T

50T

 A. Biotin TUNEL Reaction Buffer

2×0.5 mL

5×0.5 mL

 B. TdT酶

20 μL

50 μL

 C. Streptavidin-HRP

20μL

50μL

 D. Streptavidin-HRP稀释液

1mL

2×1.25mL

 E. DAB显色液A

100μL

250μL

 F. DAB显色液B

1mL

2.5mL

 G. DAB显色液C

50μL

125μL

 H. Proteinase K (2 mg/mL)
40 μL
100 μL
 I. DNase I (2 U/μL)
5 μL
13 μL
 J. 10 × DNase I Buffer
100 μL
260 μL

储存条
本产品应避光置于-20℃储存; TUNEL Reaction Buffer 避光储存于-20℃,避免反复冻融。有效期见外包装。
注: TUNEL EquiLibration Buffer、 TUNEL Reaction Buffer 和 DAB 显色液中含有有毒、致癌成分 Sodium cacodylate trihydrate 、Cobaltous chloride 以 及 3,3- Diaminobenzidine ( DAB),使用时请佩戴口罩、手套,接触皮肤后,请马上有大量水冲洗,废液请按有毒物质处理。

产品介

细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解,这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp的整数倍,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状Ladder图谱,本试剂盒采用 TUNEL 法,应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TerminaL DeoxynucLeotidyL Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂DNA 的3?-OH末端催化掺入生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-X-dUTP)。随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)特异结合,最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜观察并计数凋亡细胞。  由于正常的或正在增值的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3?-OH 形成,很少能被染色。TUNEL 法可以选择性的对凋亡细胞直接进行原位检测, 而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞,是一种更快速、直接的检测手段。

意事
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.叠氮化钠对HRP有抑制作用,实验中请勿使用含有叠氮化钠的试剂。


说明书:


  UE-T6068


常见问题解答:


现象

可能原因

建议

非特异性染色

有些细胞或组织的核酸酶或聚合酶的酶活性水平较高

取细胞或组织后马上固定并且要充分固定,以阻止这些酶导致假阳性。

TdT 酶反应时间过长或Tunel反应过程中反应液渗漏,细胞或组织表面不能保持湿润。

注意控制反应时间,并确保TdT 酶反应液能很好地覆盖样品。

使用了不适当的固定液,例如一些酸性固定液

采用推荐的固定液

标记率低

如果以乙醇或甲醇固定的样品则标记效率较低(因为在固定时染色质未能与蛋白质交联,而在操作中丢失)

采用推荐的固定液

固定时间过长,导致交联程度过高

减少固定时间

贴壁细胞如果使用药物诱导凋亡,会使发生凋亡细胞的贴壁性会减弱

在凋亡诱导结束后,可以对多孔板进行1000g离心5min,然后再吸出培养基并用PBS洗涤。如果没有适合的离心机,请注意操作轻缓,防止发生凋亡的细胞在洗涤时被洗去。后续整个操作也需要轻缓

染色背景很高

支原体污染

请使用支原体染色检测试剂盒检测是否为支原体污染

TdT 酶反应时间过长

注意控制反应时间

高速分裂和增殖的细胞,有时也会出现细胞核中的DNA 断裂。

在非高增殖期取样检测

DAB 孵育时间过长

减少DAB 染色时间

Biotin-X-dUTP 的非特异性结合

TdT 酶反应之后,再用含0.1% Triton X-100 1 mg/ml BSA PBS 洗三次。


引用及参考文献:


引用文献
1.Enhanced anti-tumor activity by the combination of TRAIL/Apo-2L and combretastatin A-4 against human colon cancer cells via induction of apoptosis in vitro and in vivo.
应用方向:检测结肠癌细胞的凋亡

2.Antiproliferation and cell apoptosis inducing bioactivities of constituents from Dysosma versipellis in PC3 and Bcap-37 cell lines.
应用方向:检测人前列腺癌细胞株PC3、乳腺癌细胞株Bcap-37、胃癌细胞株BGC-823的凋亡

3.Caudatin-2,6-dideoxy-3-O-methy-β-D-cymaropyranoside 1 induced apoptosis through caspase 3-dependent pathway in human hepatoma cell line SMMC7721.
应用方向:检测人肝癌细胞系SMMC7721的凋亡

4.Chemical constituents of the ethyl acetate extract of Belamcanda chinensis (L.) DC roots and their antitumor activities.
应用方向:检测PC3、MGC-803、Bcap-37和MCF-7细胞系的凋亡

5.Synthesis and cytotoxicity of novel ursolic acid derivatives containing an acyl piperazine moiety.
应用方向:检测胃癌细胞MGC-803和乳腺癌细胞Bcap-37的凋亡

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