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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • UEIris RT mix with DNase(All-in-One)

    产品货号: R2020

    产品规格: 20μL×20T/20μL×100T

    目录价(元):328/1280

    可替代市场同类产品

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

20T

100T

UEIris 5× RT All-in-One Mix

80 ?L

2×200 ?L

DNase

20 ?L

100 ?L

RNase-free water

400 ?L

2×1 mL

* UEIris 5× RT All-in-One Mix 包含以下组分:逆转录酶,RNA 酶抑制剂,dNTPs, buffer,Oligo(dT)20VN和随机引物。


储存条件

储存于-20℃,有效期见外包装。


产品先容

UEIris RT mix with DNase(All-in-One)是将RNA合成cDNA的一个操作更为简便的系统,含有第一链cDNA 合成所需的全部试剂,仅需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应,操作非常方便。使用该逆转录预混液15分钟内最长可获得12 kb大小的cDNA。合成的cDNA 推荐用于qPCR反应。

该预混液采用特制的高效DNase,该酶具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活,因此仅需一次加样,即可同管进行去除基因组DNA污染与逆转录反应,与使用 DNase I去除基因组DNA污染相比,无需额外加入EDTA进行失活,不仅减少了对RNA模板的损伤、降低RNase污染风险,而且节省实验时间。


说明书:


 UE-R2020

常见问题解答:


没有RT-PCR产物或产量低
1.RNA模板降解:RNA 的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的。提取的RNA应进行电泳检测以确定其是否降解。同时RNA要避免多次反复冻融。  RNA模板纯度低:提取RNA的过程中,可能残留一些盐离子、试剂,如 EDTA、酚、胍盐、磷酸盐、多胺等抑制接下来的反转录反应。建议用75%乙醇(DEPC 水配制)仔细清洗RNA沉淀。
2.引物不合适:选择合适的引物,当RNA是细菌RNA或者是没有polyA尾的RNA要选择随机引物或者特异引物。
3.目的基因含有复杂二级结构或高GC含量:建议选择随机引物进行反转录。将反转录温度提高至55℃。

RT-PCR 产物比预期长
RNA 中很可能污染了DNA。真核生物基因组DNA中含有内含子,可能参与了 PCR扩增,可以在反转录之前对RNA进行DNaseI的消化。

阴性对照中有RT-PCR产物
阴性对照中有RT-PCR产物也表明有DNA的污染。在反转录之前对RNA进行DNase I 的消化。

◆这款逆转率试剂盒有没有物种选择性?
没有物种选择性。如果反转录对象是真核细胞,因为真核细胞mRNA具有poly A尾,所以最好使用OligodT)引物。如果反转录试剂盒中同时存在OligodT)和随机引物或者只存在随机引物的则没有物种选择性。大家试剂盒中包含OligodT)和随机引物

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