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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • AugeGreenTM qPCR Master Mix

    产品货号: S2008

    产品规格: 20μL×100T/20μL×500T

    目录价(元):800/1800

    可替代的同类产品:SYBR Green、EvaGreen等

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

100T

500T

 A. 2 ×AugeGreenTM Master Mix

1 mL

5×1 mL

B. 10 × ROX reference dye

0.5 mL

1 mL

组分A包含AugeGreenTM dye,dNTP,PCR buffer(含Tris和MgCl2),热启动Taq聚合酶;组分B是10 ×ROX 参照染料。


产品参数
λabs/λem = 500/530 nm (结合 DNA)              

λabs = 471 nm (未结合 DNA)

存条
长期保存请在-20℃避光保存,有效期见外包装。使用前,将产品室温下解冻,并轻轻涡旋混匀,解冻后所有实验应在冰上操作。该产品可以重新冷冻储存。

产品介
AugeGreenTM qPCR Master Mix是一款用于实时定量PCR的即用型试剂盒。其中AugeGreenTM是一种新型的专门为qPCR和高分辨率溶解曲线分析设计的DNA结合染料,它通过一种“按需求释放”的机制,极大地降低了对PCR扩增的抑制性。
AugeGreenTM qPCR Master Mix包含一种化学修饰的热启动Taq DNA多聚酶。这种Taq酶2 min内可以被完全激活,尤其适用于快速PCR反应。此外,这种Taq DNA多聚酶在室温下没有活性,不会对DNA造成污染,性能远远优于市面上抗体修饰的热启动酶。
AugeGreenTM的另一个优点是它的安全性。常规的DNA结合染料存在潜在的致突变性。基于这方面考虑,大家研发设计了AugeGreenTM染料,它不能透过细胞膜,因而不能与活细胞的基因组DNA结合,确保了其安全性。然而,其他所有的商业性PCR荧光染料都可以在几分钟内进入细胞,例如SYBR Green I,是一种众所周知的环境毒性比溴化乙锭(EB)还要大的诱变剂。
此外,大家企业的AugeGreenTM qPCR Master Mix还有一个性能也十分卓越,即它的PCR产物可以直接用于凝胶电泳检测,不需要额外添加任何核酸染料。试剂盒中的AugeGreenTM可以作为DNA预染的核酸染料,电泳后可以直接用于观察DNA条带。


说明书:


  UE-S2008

常见问题解答:


Ct值出现过晚
1.扩增效率低,反应条件不够优化:重新设计引物;更换灵敏度更高的试剂;改用三步法反应,降低退火温度
2.反应成分降解或模板量偏低 设置阳性对照;检查RNA质量;提高反转录效率
3.PCR产物太长:重新设计引物,扩增长度建议100-200bp

无Ct值或无信号
1.循环数偏少:建议扩增循环数35以上,可以根据具体情况增加循环数至45
2.模板不足或降解:检测RNA质量;提高反转录效率;避免cDNA反复冻融
3.引物失效 :设置阳性对照;凝胶电泳检测是否存在扩增产物

扩增曲线S型异常
1.ROX添加不当:根据机型选择合适的ROX
2.模板浓度过高:适当稀释模板,减少扩增抑制
3.基线设置不正确:基线起始于3-10个循环,终止于指数扩增前

溶解曲线不是单峰
1.引物设计及用量:重新设计退火温度较高(58-62℃),无错配,Blast对比特异的引物;引物用量合适(0.2-0.4μM)
2.模板有基因组污染:优化RNA提取方法;选择合适的反转录试剂;跨内含子设计引物
3.基因表达量低:增加反转录效率,适当提高模板量
4.扩增体系不佳:使用灵敏度高,特异性强的试剂

标准曲线线性关系不佳
1.加样误差:引物预混后再分复孔:矫正移液器,使用硅化枪头;使用文库稀释液稀释标准品
2.标准品降解:避免反复冻融:电泳检测发现降解后重新制备稀释标准品
3.模板浓度高或有抑制物:改变稀释精度,增加稀释梯度 
4.引物或探针不佳:重新设计引物和探针

NTC有扩增
1.水,试剂或引物有污染:分装水和引物,试剂优先加入到体系中
2.引物二聚体:优化引物设计,提高退火温度(58-62℃);降低引物浓度(0.2-0.4?M)

扩增效率低
1.反应条件不够优化:降低退火温度,使用三步法
2.PCR抑制物:优化核酸纯化方法;适当稀释模板降低抑制物影响
3.引物设计:引物避免错配;扩增片段长度在100-200bp


引用及参考文献:


1.Systematic Analysis of Cotton Non-specific Lipid Transfer Protein Family Revealed a Special Group That Is Involved in Fiber Elongation
Meng, Chengsheng Yan, Yuanyuan Liu, Zhengwen  Chen, Liting Zhang, Yan Li, Xiuxin Wu, Liqiang Zhang, Guiyin Wang, Xingfen Ma, Zhiying  
Frontiers in Plant Science (2018)

2.
Comparative Proteomic and Physiological Analyses of Two Divergent Maize Inbred Lines Provide More Insights into Drought Stress Tolerance Mechanisms
Zenda, Tinashe Liu, Songtao Wang, Xuan Jin, Hongyu Liu, Guo Duan, Huijun
International Journal of Molecular Sciences (2018)

3
.沙棘转录因子基因HrWRKY1的克隆与表达分析
张建平,王昭玉,苏智,魏建荣,刘建凤
分子植物育种(2019)

4.
牛性控精液纯度快速评价方法研究
侯胜奎 陶晨雨 胡慧艳 刘津 李志强 张婧 贾青
中国畜牧杂志(2019)

5.
GmEXLB1, a Soybean Expansin-Like B Gene, Alters Root Architecture to Improve Phosphorus Acquisition in Arabidopsis
Youbin Kong, Bing Wang, Hui Du,Wenlong Li, XiHuan Li, Caiying Zhang
Frontiers in Plant Science (05 July 2019)

6.
Comparative Proteomics and Physiological Analyses Reveal Important Maize Filling-Kernel Drought-Responsive Genes and Metabolic Pathways
Xuan Wang, Tinashe Zenda , Songtao Liu, Guo Liu, Hongyu Jin, Liang Dai,Anyi Dong, Yatong Yang  and Huijun Duan
Int. J. Mol. Sci. 2019, 20(15), 3743

7.
沙棘HrCYP85A1基因生物信息及表达分析
王昭玉 封润霞 苏智 魏建荣 李臻 刘建凤
分子植物育种

8.
Characterization of the Hippophae rhamnoides WRKY gene family and functional analysis of the role of the HrWRKY21 gene in resistance to abiotic stresses
Zhaoyu Wang, Runxia Feng, Xue Zhang, Zhi Su, Jianrong Wei, Jianfeng Liu
Genome, 2019, 62(10): 689-703

9.
Screening for differential expression of genes for resistance to Sitodiplosis mosellana in bread wheat via BSR?seq analysis
Zhiming Hao,Miaomiao Geng,Yanran Hao,Yue Zhang,Lijing Zhang,Shumin Wen,Ruihui Wang,Guiru Liu
Theoretical and Applied Genetics November 2019, Volume 132, Issue 11, pp 3201–3221

10.
Midgut transcriptome analysis of Clostera anachoreta treated with lethal and sublethal Cry1Acprotoxin
Jie Liu,Liucheng Wang,Guona Zhou,Suhong Gao,Tianhua Sun,Junxia Liu,Baojia Gao
Arch Insect Biochem Physiol. 

11.
Comparative Proteomic and Morpho-Physiological Analyses of Maize Wild-Type Vp16 and Mutant vp16 Germinating Seed Responses to PEG-Induced Drought Stress
Songtao Liu,Tinashe Zenda,Anyi Dong,Yatong Yang,Xinyue Liu,Yafei Wang,Jiao Li,Yongsheng Tao,Huijun Duan 
Int. J. Mol. Sci. 2019, 20(22), 5586

12.GATAe transcription factor is involved in Bacillus thuringiensis Cry1Ac toxin receptor gene expression inducing toxin susceptibility
WeiWei,ShuangPan,YueminMa,YutaoXiao,YongboYang,SijiaHe,AlejandraBravo,MarioSoberón,KaiyuLiu
Insect Biochemistry and Molecular Biology Volume 118, March 2020, 103306

13.Bisphenol A in utero exposure induces ovary dysfunction in mice offspring and the ameliorating effects of Cuscuta chinensis flavonoids
Chao Han,Yuanyuan Wei,Yumeng Geng,Yuqing Cui,Shuying Li,Yongzhan Bao,Wanyu Shi
Environmental Science and Pollution Research

14.Bioinformatics and expression analysis of histone modification genes in grapevine predict their involvement in seed development, powdery mildew resistance, and hormonal signaling
Li Wang, Bilal Ahmad, Chen Liang, Xiaoxin Shi, Ruyi Sun, Songlin Zhang & Guoqiang Du 
BMC Plant Biology volume 20, Article number: 412 (2020) 

15.Identification and expression analysis of WRKY gene family under drought stress in peanut (Arachis hypogaea L.)
Nannan Zhao, Meijing He, Li Li, Shunli Cui, Mingyu Hou, Liang Wang, Guojun Mu,Lifeng LiuID, Xinlei Yang
PLoS ONE 15(4): e0231396.

16.Comparative transcriptomic analysis of contrasting hybrid cultivars reveal key drought-responsive genes and metabolic pathways regulating drought stress tolerance in maize at various stages.
Songtao Liu,Tinashe Zenda,Jiao Li,Yafei Wang,Xinyue Liu,Huijun Duan 
PLoS ONE 15(10): e0240468. 

17.Double NCED isozymes control ABA biosynthesis for ripening and senescent regulation in peach fruits
PengfeiWang,SiyuanLu,XueyingZhang,HydenBrennan,LijieQin,LipengLiu,YangyangBai,YanHan,ZhiliangWen,JizhongXu,HongboCao,HaijiangChen
Plant Science Available online 4 November 2020, 110739

18.玉米热激蛋白HSP70-12基因的克隆及表达分析
王帅 祁茂冬 魏凤菊
玉米科学. 2020年05期 第32-38页

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